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微生物实验应用宝典
我们所说的微生物学实验室是生物学领域的一个基本实验室。那么我们对于一个完备的微生物学实验室,我们需要配置哪些仪器呢?
微生物实验室基本配置都有哪些要求?
(1)超净工作台:微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养,那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。超净工作台的主要用途是微生物的接种及处理时的无菌操作。
(2)培养箱:培养箱有很多种类型,它的用途在于为微生物提供一个适宜的生长环境。主要类型包括生化培养箱,霉菌培养箱,厌氧培养箱等。它们的区别主要在于:
a.生化培养箱只能控制温度。这类培养箱可作为一般细菌的平板培养。
b.霉菌培养箱可以控制湿度和温度。它主要用在霉菌的培养。
c.CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养,例如,双歧杆菌。
(3)天平:它是用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平,电子天平按照精度不同又有不同的级别。
(4)微生物均质器:它的作用在于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无损伤、无污染、不升温、不需要洗刷器皿,不需灭菌处理等特点,是微生物实验中使用较为方便的仪器。5
(5)菌落计数器:菌落计数仪可帮助操作者计数菌落数量。通过放大、拍照、计数等方式准确获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可直接连接电脑来完成自动计数的操作,方便快捷的计数。
(6)微波炉/电炉:它主要用于溶液的快速加热,微生物固体培养基的加热熔化。
(7)高压灭菌锅:微生物学所用到的大部分实验物品、培养基、试剂都应严格通过消毒灭菌。灭菌锅也有不同的大小型号,有些是手动的,有些是全自动的。用户就要根据自己的需要选购。
(8)移液器:它是用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、微量取液器、移液管、刻度试管、烧杯等。9
(9)冰箱:冰箱是实验室中保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存,有些要求是负20度保存,实验人员一定要看清试剂的保存条件,放置在恰当的温度下保存。具体来说,不同温度下保存的物品如下:
a.4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。
b.-20℃适用于某些试剂、药品、配好的抗生素等。
c.-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、感受态等的保存。
(10)生物安全柜:微生物实验中所涉及到的部分试剂和样品微生物有些是有毒的,对于操作人员来说伤害比较大。为了防止有害德悬浮微粒、气溶胶的扩散,可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全的保护作用。
(11)摇床:摇床是实验室比较常用的一种仪器,在微生物实验操作过程中,液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。
(12)纯水装置:纯水装置包括纯水机和蒸馏水器。蒸馏水器的价格比较便宜,但在造水过程中需要有人值守;纯水机价格高些,但是使用方便,可以储存一定量的纯水。纯水的使用也有不同级别,实验中配制试剂,配制培养基均都需用纯水。
(13)生物显微镜:由于微生物的体积比较小,所以在观察时需要借助生物显微镜。生物显微镜主要用于微生物和微小物品结构和形态等方面的观察。
(14)冷冻干燥机:主要适用于细菌、微生物、酵母等的干燥作用。用于干燥保存易脱水的产品,在加水以后能够再次恢复原材料的特性,不影响其生物活性。通过冷冻干燥,细菌之类的材料成为干燥状态,从而不会发生化学改变。
(15)分光光度计:分光光度计在微生物试验中用于测定微生物悬液的浓度,可以正确选取合适的培养时间。一般是在600nm波长测定菌液浓度。
(16)恒温干燥箱:恒温干燥箱是用于灭菌和洗涤后的物品烘干。烘箱有不同的控温范围,用户可以根据实验需求进行选择。
(17)恒温水浴锅:水浴锅是一种控温装置,水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分。有些微生物反应需要在37度,42度,56度下水浴进行,所以恒温水浴锅可以提供需要的温度。
(18)酸度计:用于配置试剂时精确测量pH值,从而保证配置的溶液的精确性。有时也需要利用pH计测定样品溶液的酸碱度。
(19)离心机:用于收集微生物菌体以及其他沉淀物。离心机有冷冻和常温之分。有些样品由于在常温下不太稳定,需要低温环境,要视样品的种类而定。
(20)液氮罐:液氮罐储存液氮,可用于细菌、酵母、霉菌和大型真菌等各种微生物的长期保存。
以上介绍的是微生物实验室的基本仪器配置,在组建实验室时还需要其他一些耗材,例如酒精灯,试管架,无菌采样及称样袋,接种环,三角瓶,量筒,脱脂棉,纱布,试管筐,玻璃试管,灭菌吸管,凉干架,剪刀,镊子,过滤器等。
设施和环境条件
实验室的建设、总体布局和设施应能满足从事检验工作的需要,并以能获得可靠的检测结果为重要依据,且符合所开展微生物检测活动生物安全等级的要求。对影响检测结果或涉及生物安全的设施和环境条件的技术要求应制定成文件。(CL-09:2013新增)
环境设计总原则:
环境不影响检测结果准确性考虑:
实验室面积与工作量和工作类型匹配;
实验室区域与办公区域分开;
单方向工作流程,避免交叉污染;
卫生指标项目:
洁净工作台或洁净室(十万级、特殊项目百级)
致病菌分离鉴定:
生物二级实验室(biosafety level2 BLS-2)
问题:
1.分区:培养基(溶液)配置区域与洗刷消毒区域未进行物理隔离;
2.单方向工作流程:样品接收(档案)、溶液配制、洁净室、鉴定、洗刷消毒和高压灭菌;
3.生物安全柜放置位置和使用:
(1)在安全柜的后方和左右两侧尽可能留有30cm的空间,利于维护。
(2)在安全柜的上面应留有30~35cm的空间,以便准确测量和更换过滤器。
(3)生物安全柜应远离人员、物品流动以及可能会扰乱气流的地方。
操作者:
1.要在实验开始前将所有必要的物品置于安全柜内,以尽量减少双臂进出前面窗口的次数;
2.操作者的双臂应与由上而下的气流相垂直地缓慢进出前面的开口;
3.在手和双臂伸入到安全柜中大约一分钟后再开始正式工作;
物品得这么放:
1.在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。安全柜内放置的物品数量必须保持在最低数量。
2.放入安全柜内的物品应尽可能地放在工作台后部的边缘位置,并使其在操作中不会阻挡后部吸风槽的的正常回风功能。
3.II级生物安全柜前面的前吸风槽不能被记录本、仪器设备或其它物品阻挡。
4.保持所有材料远离玻璃悬窗至少4英寸(10cm)。
5.在操作期间,避免移动材料,避免操作者的手臂在前方开口处移动。
生物安全柜的操作和维护
※在开始工作以前及完成工作以后,应至少让安全柜工作5分钟来完成将污染的空气(气溶胶)排出的“净化”的过程;生物安全柜的所有维修工作应该由有资格的专业人员来进行。在生物安全柜操作中出现的任何故障都应该报告,并应在再次使用之前先进行维修。
紫外线杀菌灯:
如使用紫外线杀菌灯,应每周进行表面清洁,以祛除可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢。用适宜的玻璃清洗剂,对玻璃悬窗及UV灯管进行清洗。使用紫外线杀菌灯时要注意保护人员眼睛和皮肤避免因不慎暴露而造成伤害。紫外线杀菌灯应定期更换(核查紫外线照射强度,试纸或手持式检测仪)。
清洁和消毒:
在每次使用前后,要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和四周内壁要用消毒剂进行擦拭,所用的消毒剂要能够杀死安全柜内可能发现的任何微生物。可用75%的乙醇或适宜的消毒液,对安全柜内部和工作面进行表面消毒(不可使用含卤素的消毒剂清洁表面)。
在生物安全柜内的实验操作结束后,包括仪器设备在内的所有物品都应清除表面污染,并移出生物安全柜。
灭菌处理:
生物安全柜移动、变换用途、更换过滤器之前等,必须用灭菌的方法清除污染;
最常用的方法之一是用甲醛蒸汽熏蒸,这些工作应该由有资格的专业人员来操作,这样才能正确有效地清除生物安全柜的污染,先进的消毒方法可使用二氧化氯制剂或过氧化氢蒸汽消毒机。
生物安全柜生物安全性能评价:
检测项目应包括:
现场检测的项目应至少包括垂直气流平均速度、气流模式、工作窗口气流平均速度、送风高效过滤器检漏、排风高效过滤器检漏、柜体内外的压差(适用于Ⅲ级生物安全柜)、工作区洁净度、工作区气密性(适用于Ⅲ级生物安全柜)。过滤器检漏是重要安全指标!
生物安全柜的检验:
定期请有资质的专业机构进行“检漏”,推荐为1年1次,索要证书及原始检测数据。
不合格应马上更换HEPA滤膜(高效过滤器应由有资质的专业人员进行更换,更换前应进行原位消毒,确认合格后,按标准操作流程进行更换。新换高效过滤器,应进行检漏,确认合格后方可使用。)
对可能影响检测和校准结果的设施和环境条件的技术要求加以文件化
洁净室运行和监控作业指导书
附:食品微生物实验室必备仪器清单
一、无菌室和超净工作台(净化工作台)是实验室的核心部分,主要为样品提供保护,保证实验结果的准确和人员的安全。
(一)无菌室:无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境。无室的主要组成设备的空气自净器,传递窗,紫外线灯等。严格的无菌室可能还装备风彬室等。
(二)超净工作台(净化工作台):超净工作台(净化工作台)作为代替无菌室的一种设备,使用简单方便,为实验的开展提供一个相对无菌的操作台。超净工作台(净化工作台)根据风向分为水平式和垂直式。
二、培养箱:
主要用于实验室微生物的培养,为微生物的生长提供一个适宜的环境。
(一)普通培养箱:一般控制的温度范围为:室温+5-65度,又分为电热恒温培养箱和隔水式恒温培养箱。
(二)生化培养箱:一般控制的温度范围为:5-50度。
(三)恒温恒湿箱:一般控制的温度范围为:5-50度,控制的湿度范围为:50-90%。可作为霉菌培养箱。
(四)厌氧培养箱:适用于厌氧微生物的培养。
三、干燥箱:
四、灭菌器:
五、天平:一般要求具备精度达到万分之一的分析天平。
六、显微镜:主要用于微生物和微小物品结构,形态等的观察。
七、分光光度计:在QS中用于生产方便面,茶饮料,肉制品,乳制品,棉白糖的企业。
八、酸度计:在QS中用于生产果蔬罐头,白沙糖,饮用水类的企业。
九、电导率仪和浊度仪:在QS中用于生产饮用水的企业。
十、折光仪:在QS中用于生产果蔬罐头,饮料类的企业。
十一、恒温水温浴锅:在QS中用于生产方便面,速冻面米食品企业。
十二、定氮装置:在QS中用于生产乳制品,含蛋白质饮料的企业。
十三、杂质度过滤机:在QS中用于生产乳品企业。
实验室配套常用设备
1.通风柜
2.离心机
3.纯水器
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